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Estabilidad metabólica

La desaparición de un compuesto principal o la aparición de metabolitos se miden luego de la incubación con hepatocitos, microsomas hepáticos o plasma, lo cual permite calcular la vida media de eliminación y la eliminación intrínseca. Posteriormente, se puede dilucidar la biotransformación del artículo de prueba y los perfiles de metabolitos.
  • Eficacia reglamentaria para ensayos posteriores

  • Pruebas de plasma, hepatocitos y microsomas

  • Evaluación integral de estabilidad farmacológica

Consideraciones reglamentarias para estudios de estabilidad metabólica

Estos estudios se usan para medir la vida media de un compuesto, calcular la eliminación intrínseca y predecir los perfiles farmacocinéticos humanos antes de los ensayos que se realizan por primera vez en humanos.

Método para estabilidad metabólica

  • Sistema de prueba: plasma, microsomas hepáticos o hepatocitos criopreservados agrupados
  • Especies de prueba: ratón, rata, perro, conejo, cerdo enano, mono y humano; especies adicionales a pedido
  • Concentraciones del artículo de prueba: dos concentraciones probadas por especie (1 y 10 µM) por triplicado

Estabilidad metabólica en hepatocitos

El artículo de prueba se incuba a dos concentraciones con aproximadamente 1 x 106 hepatocitos/mL suspendidos en William's Medium E por hasta 5 intervalos de tiempo y se detiene por la incorporación de un solvente orgánico.

Se realizan las incubaciones de control en el medio de incubación únicamente para determinar la estabilidad del artículo de prueba en condiciones de incubación. Se evalúa la integridad metabólica de cada lote de hepatocitos con 7-etoxicoumarina u otro marcador adecuado.

Estabilidad metabólica en plasma

El artículo de prueba se incuba en dos concentraciones en plasma por hasta 5 intervalos de tiempo y se detiene por la incorporación de un solvente orgánico. Las incubaciones de control positivo incluyen procaína (hidrolizada por carboxilesterasa) u otro marcador metabólico adecuado.

Estabilidad metabólica en microsomas

El artículo de prueba se incuba en dos concentraciones con microsomas (0,5 mg/ml proteína) en presencia de NADPH por hasta 5 intervalos de tiempo y se detiene por la incorporación de un solvente orgánico. Se realizan las incubaciones de control en ausencia de NADPH para determinar la estabilidad del artículo de prueba en condiciones de incubación.

Se evalúa la integridad metabólica de cada lote de microsomas para enzimas de fase 1 con 7-etoxicoumarina u otro marcador adecuado.

Análisis de muestras

Se analizan las muestras de incubación del artículo de prueba restante mediante un método analítico de cromatografía de líquidos-espectometría de masas (LC-MS). Luego, se determina el porcentaje del artículo de prueba restante en muestras en comparación con la concentración inicial. Después de la aprobación, las muestras seleccionadas se pueden analizar en mayor profundidad para caracterizar o identificar metabolitos por LC-MS.


Productos finales

Estos ensayos proporcionan información sobre la estabilidad del fármaco (que se calcula en la vida media y la eliminación intrínseca) a través del uso de fracciones celulares o subcelulares. Un mayor análisis de las incubaciones para la caracterización e identificación de metabolitos puede dilucidar las vías de biotransformación y permitir una mejor comparación entre las especies de pruebas preclínicas y los metabolitos humanos.