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Citometría de flujo

Citometría de flujo analítico de avanzada para cubrir todos los aspectos de sus necesidades de desarrollo farmacológico
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Los avances más recientes en investigación y tratamiento de cáncer se han dado en el campo de la inmuno-oncología, usando inmunoterapias nuevas para fortalecer el sistema inmunológico del portador y así atacar y destruir las células tumorales con mayor eficacia. Entre la lista de tratamientos terapéuticos aprobados por la FDA con actividad inmunorreguladora tenemos inmunoterapias con anticuerpos y basadas en citocinas, fármacos de molécula pequeña y terapias basadas en células. El éxito que han tenido estas y otras terapias en prolongar la supervivencia ha puesto énfasis en el desarrollo de nuevas terapias con un solo agente o una combinación de agentes con mayor eficacia en el tratamiento de cáncer.

Para el desarrollo productivo de inmunoterapias hace falta un análisis robusto y completo del sistema inmunitario en el microambiente tumoral, sangre periférica y otros tejidos receptores.

Para ello, nuestro servicio de citometría de flujo por contrato le ofrece un recurso de citometría de flujo analítico de avanzada para cubrir todos los aspectos de sus necesidades de desarrollo farmacológico. Ejecute sus estudios de generación de muestras con nosotros de un día para el otro: envíenos sus muestras preclínicas o clínicas no reguladas por CLIA y nosotros nos encargaremos de hacer la citometría de flujo.

Perfiles inmunitarios básicos a integrales

Con más de 50 años de experiencia en conjunto, nuestro equipo analítico de servicio completo puede agregar una rama de citometría de flujo ex vivo a cualquier estudio in vivo.  Nuestra lista de paneles de anticuerpos estandarizados (ver abajo) se ha validado en varios modelos de cáncer in vivo y ofrecen un análisis básico a integral de una amplia variedad de subgrupos inmunes de linaje linfoide y mieloide para capturar cambios que ocurren en la respuesta inmunológica desencadenada por el tratamiento con un agente de prueba in vivo. Vea una lista de nuestros paneles abajo.

Análisis de células T CD4+, CD8+ y reguladoras combinado con interrogación de puntos de control/marcadores de activación usando el panel de células T

El panel de células T integral combina la utilidad de los paneles de células T básico, reguladoras y de activación/agotamiento en un análisis integral del perfil de células T dentro de los tejidos. Los datos de arriba muestran (A) el análisis del subgrupo de células T CD4+/CD8+ en tumores murinos usando un modelo de carcinoma mamario 4T1, (B) el análisis de células T reguladoras en bazos de ratones con el adenocarcinoma colorrectal CT.26 y (C) los niveles de expresión de CTLA-4, PD-1 y Ki-67 en subgrupos de células T de tumores derivados de la línea celular A20 (linfoma de células B).

Análisis de subgrupo de células T y B en bazo murino.

El panel de células T y B básico se puede usar para cuantificar células T CD4+ y CD8+ T así como también fracciones de células B en muestras heterogéneas. Este panel solo ocupa 6 canales de fluorescencia, lo que deja varios canales disponibles para hacer otras caracterizaciones celulares ingresando anticuerpos adicionales. En el estudio de arriba se analizaron células T CD3+ y células B CD19+ en el gate de células vivas. Las células T además se subdividieron en poblaciones CD4+ y CD8+.

Análisis de activación de células T en el modelo de linfoma de células B A20 murino

Uno de los retos que surgen durante el desarrollo de nuevas inmunoterapias es superar la pérdida de la actividad antitumoral que ocurre en las células T dentro del microambiente tumoral. Un estado conocido como agotamiento de las células T, que se puede identificar basado en la expresión relativa de distintos puntos de control inmunitario y marcadores de activación. El panel de activación/agotamiento de células T es una expansión del panel de células T básico y se puede usar para medir la expresión de ciertos biomarcadores clave en diferentes tejidos. En estudio de arriba se midió la expresión de las proteínas de puntos de control inmunitario CTLA-4 y PD-1 y también el marcador de proliferación sustituto Ki-67 en subgrupos de células T dentro de tumores derivados de la línea celular A20.

Análisis de activación de células T en el modelo de linfoma de células B A20 murino

Uno de los retos que surgen durante el desarrollo de nuevas inmunoterapias es superar la pérdida de la actividad antitumoral que ocurre en las células T dentro del microambiente tumoral. Un estado conocido como agotamiento de las células T, que se puede identificar basado en la expresión relativa de distintos puntos de control inmunitario y marcadores de activación. El panel de activación/agotamiento de células T es una expansión del panel de células T básico y se puede usar para medir la expresión de ciertos biomarcadores clave en diferentes tejidos. En estudio de arriba se midió la expresión de las proteínas de puntos de control inmunitario CTLA-4 y PD-1 y también el marcador de proliferación sustituto Ki-67 en subgrupos de células T dentro de tumores derivados de la línea celular A20.

Análisis de células T CD4+, CD8+ y reguladoras combinado con interrogación de puntos de control/marcadores de activación usando el panel de células T

El panel de células T integral combina la utilidad de los paneles de células T básico, reguladoras y de activación/agotamiento en un análisis integral del perfil de células T dentro de los tejidos. Los datos de arriba muestran (A) el análisis del subgrupo de células T CD4+/CD8+ en tumores murinos usando un modelo de carcinoma mamario 4T1, (B) el análisis de células T reguladoras en bazos de ratones con el adenocarcinoma colorrectal CT.26 y (C) los niveles de expresión de CTLA-4, PD-1 y Ki-67 en subgrupos de células T de tumores derivados de la línea celular A20 (linfoma de células B).

Análisis de subgrupos de células exterminadoras naturales (NK) y células dendríticas (CD) en modelo de adenocarcinoma colorrectal CT.26

Los subgrupos de células NK son muy conocidos por su actividad antitumoral y capacidad de controlar el crecimiento de muchos tumores. Las células CD tienen una función tanto protumoral como antitumoral y son una diana para inmunoterapias basadas en vacunas. Se ha demostrado que las CDNK (conocidas como CDIK) poseen características funcionales tanto de las células NK como de las células DC. El panel de células exterminadoras naturales se puede usar para identificar estos subgrupos. El estudio de arriba se hizo para cuantificar los porcentajes de los subgrupos de células NK, CD y CDNK dentro de células inmunes  Ly6G-Ly6C derivadas de un tumor.

Análisis de células supresoras derivadas de mieloides (CSDM) en un modelo oncológico colorrectal CT.26 murino

Los subgrupos de CSDM pueden influir en varias respuestas protumorales, incluso al suprimir la función inmunitaria, y son una diana atractiva para la inmunoterapia. Se trata de una población celular heterogeneica.  Su fenotipo se puede moldear por las señales en el microambiente tumoral. Los datos de arriba demuestran cómo se puede usar el panel de CSDM para la identificación básica de subgrupos de CSDM granulocíticas y (-G) y monocíticas (-M) en tumores derivados de CT.26. Primero se identificaron las células mieloides CD11b+ en el gate CD45+ después de excluir los linfocitos CD3+CD19+. Luego se diferenciaron las CSDM-G y CSDM-M basado en la expresión de receptores de superficie Ly-6G y Ly-6C.

Análisis de células supresoras derivadas de mieloides (CSDM), células exterminadoras naturales (NK) y células dendríticas (CD) en un modelo tumoral colorrectal CT.26 murino.

El panel mieloide ampliado es una expansión del panel de CSDM básico que posibilita el análisis de subgrupos NK y CD además de las poblaciones CSDM. En los datos que se muestran estos subgrupos se analizaron en tumores derivados de CT.26. Las CSDM monocíticas (-M) y granulocíticas y (-G) expresan altos niveles de la proteínas Ly-6C y Ly-6G respectivamente (Bright) y coexpresan el marcador CD11b. Las células NK y CD se analizaron en el gate de exclusión de CSDM y luego se diferenciaron basado en marcadores pan-NK (CD49b y CD335) vs. expresión de la proteína CD11c específica de las CD. Los picos en gris y rojo representan células con y sin tinción CD11b respectivamente.

Análisis de células mieloides en tumores usando el panel mieloide integral de MI Bioresearch

El panel mieloide integral es una expansión del panel de células supresoras derivadas de mieloides básico para un análisis más profundo de las poblaciones de células mieloides. También permite el análisis del receptor inhibidor inmune PD-L1 tanto en subgrupos de células tumorales como inmunes. Los datos de arriba demuestran cómo se puede usar el panel mieloide integral para A) medir la expresión de PD-L1 en células tumorales e inmunes (modelo de carcinoma mamario 4T1), B) cuantificar subgrupos de células dendríticas y macrófagos (modelo de tumor colorrectal CT.26) y C) caracterizar subgrupos de CSDM por la expresión de CD115, que es un receptor que ha demostrado estar directamente correlacionado a la actividad supresora (modelo de tumor colorrectal CT.26). Este panel también puede ser útil en el análisis de poblaciones de monocitos y neutrófilos (no se muestra). Los picos en rojo y gris representan células con tinción para el antígeno diana y células sin tinción respectivamente.

Análisis de macrófagos asociados a tumores activados clásicamente (M1) y alternativamente (M2) en un modelo de adenocarcinoma colorrectal CT.26

Los macrófagos M1 y M2 son dos de los principales grupos de macrófagos que residen dentro del microambiente tumoral. Tienen funciones opuestas con respecto a la progresión del cáncer y por lo tanto son dianas para nuevas inmunoterapias. El estudio de arriba demuestra cómo se puede usar el panel de macrófagos asociados a tumores M1 y M2 para perfilar las proporciones de estos dos grupos. A tal fin, se excluyeron los subgrupos de CSDM para poder identificar los macrófagos CD11b+/F480+. Esta fracción se analizó para analizar los macrófagos M2 (CD206+) y los macrófagos M2 (CD206-MHCII+).

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